Rambler's Top100
Международная научная хирургическая ассоциация
Домой Ассоциация Конференции Публикации Спонсорам
Международная научная хирургическая ассоциация
Международная научная хирургическая ассоциация
Домой
Ассоциация
Конференции
Публикации
Спонсорам
Международная научная хирургическая ассоциация

English

 

Russian

 

 

Добро пожаловать на наши конференции!!!
alternatead

Прошедшие конференции по хирургии

Сердечно-сосудистая хирургия и ангиология - 2003
Сердечно-сосудистая хирургия и ангиология - 2004
Сердечно-сосудистая хирургия и ангиология - 2005
Сердечно-сосудистая хирургия и ангиология - 2006
Cердечно-сосудистая хирургия и ангиология - 2007
Сердечно-сосудистая хирургия и ангиология - 2008
Сердечно-сосудистая хирургия и ангиология - 2009
Сердечно-сосудистая хирургия и ангиология - 2010
InterSpine - 2004
InterSpine - 2005
InterSpine - 2006
InterSpine - 2007
InterSpine - 2008
InterSpine - 2009
InterSpine - 2010
Новые технологии в медицине - 2004
Новые технологии в медицине - 2005
Новые технологии в медицине - 2006
Новые технологии в медицине - 2007
Новые технологии в медицине - 2008
Новые технологии в медицине - 2009
Новые технологии в медицине - 2010


Виртуальная клиника семейной медицины

Медицинская литература
В нашей библиотеке Вы можете ознакомиться с некоторыми интересными книгами и большим количеством статей по хирургии и различным разделам медицины.
В нашем магазине Вы можете приобрести необходимые Вам в повседневной работе книги и CD/DVD диски.

 

Информация для врачей
Подпишитесь на нашу рассылку и Вы будете своевременно узнавать о новостях медицины, планируемых конференциях и форумах.
Новости медицины

 


Т.Ю.Салина, Т.И.Морозова, Д.В.Балашов

Распространенность генетических мутаций среди клинических изоляторов m. Tuberculosis больных с разным типом течения туберкулезного процесса

Саратовский государственный медицинский университет, Саратов, Россия



Аннотация

Цель. Определить дополнительные микробиологические критерии, способствующих развитию тяжелого, прогрессирующего туберкулеза легких.

Мы проводили выяление первичной множественной лекарственной устойчивости и спектра генетических мутаций ДНК M. tuberculosis в клинических изолятах мокроты у 48 больных с разным типом течения туберкулеза. У всех пациентов определение лекарственной чувствительности к рифампицину и изониазиду выполнялось на биологических микрочипах. Технология исследований, набор реагентов и оборудования разработаны сотрудниками института молекулярной биологии им. В. А.Энгельгардта Российской академии наук. У пациентов с тяжелым прогрессирующим течением туберкулезного процесса по сравнению с пациентами с благоприятно протекающим туберкулезом достоверно чаще встречаются следующие виды мутации: в гене rpo B (ser531) и в гене kat G (ser 315), что свидетельствует о высоком уровне первично множественной лекарственной устойчивости у этих больных.

Ключевые слова :

Туберкулез, мутации, ДНК



В последние годы во всем мире, в том числе и России отмечается увеличение числа больных, инфицированных мультирезистентными штаммами M. tuberculosis [1,2]. Туберкулез, обусловленный микобактериями с множественной лекарственной устойчивостью, отличается тяжелым течением, низкой эффективностью лечения и высокой летальностью. Такие пациенты на протяжении длительного времени являются эпидемиологически наиболее опасными, способствуя распространению инфекции. Быстрое определение лекарственной устойчивости микобактерий туберкулеза и своевременная коррекция лечения является наиболее актуальной проблемой фтизиатрии. Методами молекулярной генетики было доказано, что в основе лекарственной устойчивости лежат точечные мутации клинических штаммов микобактерий туберкулеза [7,8,5,6]. При неправильно подобранной комбинации химиопрепаратов происходит селекция антибиотикоустойчивых штаммов и их преимущественный рост, что ведет к росту и распространению лекарственно-устойчивого туберкулеза [3]. Быстрое выявление микобактерий туберкулезного комплекса и определение их лекарственной чувствительности к препаратам основного ряда (рифампицину и изониазиду) стало возможным после разработки высокотехнологичного метода определения генных вариантов на биологических микрочипах [8]. Экспериментальными исследованиями было установлено, что определенные виды мутаций ДНК M. tuberculosis сопряжены с высокой степенью лекарственной устойчивости.

Целью настоящей работы была оценка характера мутаций ДНК M. tuberculosis и выявление дополнительных микробиологических критериев, способствующих развитию тяжелых, прогрессирующих и генерализованных форм туберкулеза легких.

Нами проводилось определение первично множественной лекарственной устойчивости и спектра генетических мутаций ДНК M. tuberculosis в клинических изолятах мокроты больных с разным типом течения туберкулеза. Под наблюдением находилось 48 больных активным впервые выявленных туберкулезом легких в возрасте от 18 до 65 лет. Из них: мужчин-32, женщин-16 человек. Пациенты были распределены на 2 группы в зависимости от характера течения патологического процесса. Группу 1 составили 14 больных с тяжелым, распространенным, прогрессирующим и осложненным течением туберкулеза. Из них диссеминированный туберкулез легких диагностирован у 6 человек, казеозная пневмония - у 5, фиброзно-кавернозный туберкулез у 3 человек. У всех пациентов этой группы наблюдались осложнения процесса в виде кахексии, легочно-сердечной и дыхательной недостаточности, туберкулеза гортани и бронхов. В группу 2 были включены 34 пациента с ограниченным (1-2 сегмента) туберкулезным процессом с нерезко выраженным интоксикационным и бронхолегочным синдромом и при отсутствии осложнений. Из них инфильтративный туберкулез легких был диагностирован у 29 человек, туберкулемы легких - у 5 человек.

У всех пациентов наряду с традиционными методами микробиологической диагностики туберкулеза, выявление микобактерий туберкулезного комплекса и определение их лекарственной чувствительности к рифампицину и изониазиду проводили на биологических микрочипах. Использовали набор реагентов «ТВ-BICHIP MDR». Результаты реакции учитывали с помощью специального оборудования, представляющего собой аппаратно-программный «Чипдетектор-01». Технология проведения исследований и оборудования разработаны сотрудниками института молекулярной биологии им. В. А.Энгельгардта РАН. Исследования проводили с использованием набора реагентов ТВ-Биочип (MDR) /ООО «Биочип-ИМБ»/, Москва.

Базовая методология проведения исследований основана на выделении ДНК микобактерий туберкулеза из мокроты обследуемых пациентов, проведения 2-х последовательных мультиплексных ПЦР со специфическими для микобактерий туберкулеза праймерами и гибридизации продуктов амплификации 2-й стадии ПЦР с олигонуклеотидными зондами, помещенными в ячейках микрочипа.

В результате проведенных исследований установлено, что у пациентов группы 1 с тяжелым, прогрессирующим и осложненным течением туберкулеза множественная лекарственная устойчивость микобактерий туберкулеза к изониазиду и рифампицину (МДР) наблюдалась в 36,4% случаев. В этой группе в 75% образцов мокроты преобладали мутации ser 531 rpo B гена и в единичных случаях встречались мутации ser 513, 533 rpo B гена. Мутации в гене kat G (ser 315) наблюдались в 100% случаев пациентов 1 группы с выявленной МДР, сочетание мутаций в гене kat G и inh А гене наблюдалось у 25%. У больных 2-й группы с ограниченным и благоприятно протекающим туберкулезным процессом множественная лекарственная устойчивость обнаружена в 32,4% случаев, что практически не отличалось от пациентов группы 1. Мутации в гене rpo B (ser 531) в группе 2 наблюдались в 45,5% клинических изолятов M. tuberculosis, что достоверно ниже, чем у пациентов группы 1 (?<0,05). У остальных пациентов встречались единичные мутации в rpo B гене His 526 в 27,3% случаев, Asp-516 в 9,1%, Leu 511 в 9,1%. Мутации в гене kat G (ser 315) наблюдались в 63,6% случаев образцов мокроты пациентов группы 2 против 100% в группе 1 (?<0,05), в гене inhA в 54,5% случаев, из них изолированно в гене inhA у - 27,3%, в сочетании с геном kat G в 27,3% случаев.

Таким образом, у пациентов с тяжелым прогрессирующим течением туберкулезного процесса достоверно чаще встречаются мутации в rpo B гене (ser531) и kat G (ser 315), кодирующие лекарственную устойчивость к рифампицину и изониазиду, что свидетельствует о высоком уровне первично множественной лекарственной устойчивости у этих больных.

Литература

  1. Пресс-релиз ВОЗ /Женева, 16 марта 2004 Европейское региональное бюро ВОЗ.
  2. Исакова Ж.Т., Гончарова З.К., Алдашев А.А. Характеристика спектра лекарственной устойчивости рифампицин - резистентных штаммов M. tuberculosis к другим противотуберкулезным препаратам первого ряда //Пробл. туб.-2008-№11-С.39-41
  3. Мишин В.Ю. Оптимизиция лечения впервые выявленных больных туберкулезом легких на основе принципов доказательной медицины //Химиотерапия туберкулеза в современных эпидемиологических условиях- М., 2008-С.53-68
  4. Михайлович В.М., Лапа С.Н., Грядунов Д.А. и др. Использование методов гибридизации и ПЦР на специализированном ТВ микрочипе для обнаружениея рифампицин-резистентных штаммов Mycobacterium tuberculosis //Бюл. Эксп. Биол.-2001-№1-С.112-117.
  5. Степаншин Ю.Г., Степаншина В.Н., Шемякин И.Г. Молекулярные механизмы устойчивости Mycobacterium tuberculosis к лекарственным препаратам //Антибиотики и химиотерапия-1999-№4.-С.39-43
  6. Самойлова А.Г., Марьяндышев А.О. Лекарственная устойчивость микобактерий туберкулеза - актуальная проблема фтизиатрии (обзор литературы) //Пробл. туб.-2005-№7.-С.3-8.
  7. Telenti A. Genetics of drug resistance in tuberculosis //Clin. Chest Med.-1997-vol.18-p.55-64
  8. Gradunov D., Mikhailovich V., Lapa S. et al. Evaluation of hybridization on oligonucleotide microarreays for analysis of drugresistant Mycobacterium tuberculosis //Clin. Microbiol. Infect.-2005-№11-P.531-539

Contact author: Татьяна Юрьевна Салина

E-mail: SalinaTU@rambler.ru

PDF - версия статьи

PDF - версия статьи

 

На правах рекламы:




 

 
Домой
Ассоциация
Конференции
Публикации
Спонсорам
 

Rambler's Top100